摘要：用 D- 101 大孔樹脂吸附層析法對韭菜汁進(jìn)行初步分離，對韭菜原汁及其分離成分進(jìn)行平板法體外抑菌實驗。結(jié)果表明：韭菜汁對大腸桿菌、綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌、痢疾桿菌等 4 種供試菌都有抑制作用；大孔樹脂分段分離成分中，蒸餾水洗脫成分對供試菌無抑菌能力，體積分?jǐn)?shù) 50%乙醇洗脫前段對 4 種供試菌有較強(qiáng)的抑菌作用，體積分?jǐn)?shù) 95%乙醇洗脫段對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌有抑制作用。
韭菜（Chinese chives），在植物學(xué)上屬百合科蔥屬，為一種多收的多年生宿根性辛香類蔬菜，大名起陽草、壯陽草、長生韭等。韭菜中含有蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物，還有豐富的胡蘿卜素、Vc 等維生素。韭菜汁對大腸桿菌、綠膿桿菌等幾種常見致病菌有抑菌活性。因此，研究韭菜所含成分的抑菌能力有實際意義。大孔樹脂吸附技術(shù)已廣泛用于中藥有效成分的提取、分離、純化工藝，且越來越多的用于中成藥制備工藝，且具有穩(wěn)定性高、比表面積大、吸附容量大、選擇性好和再生處理方便等優(yōu)點(diǎn)。本文用大孔樹脂為固定相，水和不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇為流動相對韭菜汁進(jìn)行梯度洗脫，比較各洗脫部位成分對大腸桿菌、綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌、痢疾桿菌等 4 種菌的抑菌能力，為韭菜提取物的藥用價值研究提供理論依據(jù)。

1 材料和方法
1.1實驗材料
大腸桿菌（Escherichia col）i、綠膿桿菌（P.aeruginosa）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）、痢疾桿菌（Diarrhea bacillus），由遵義醫(yī)學(xué)院珠海校區(qū)微生物教研室提供；新鮮韭菜（購于廣東珠海金海岸市場）；D- 101 型大孔樹脂，天津市大鈞科技開發(fā)有限公司；體積分?jǐn)?shù)95%乙醇（分析純）。
1.2 主要儀器設(shè)備
立式壓力蒸汽滅菌器，江陰濱江醫(yī)療設(shè)備廠；BHC- 1300IIA/B3生物安全柜，蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；Scientz- 10N冷凍干燥機(jī)，寧波新芝生物科技股份有限公司；UV- 2550 紫外分光光度系統(tǒng)，日本島津；低溫冰箱，海爾；JC303 型電熱恒溫培養(yǎng)箱，上海成順儀器儀表有限公司。
1.3 樣品制備
1.3.1 韭菜汁的榨取
取新鮮韭菜 500 g，用蒸餾水沖洗干凈后，切成小段放入研缽中進(jìn)行研磨，待韭菜磨成糊狀后用干凈紗布過濾，對濾液進(jìn)行抽濾，得 50 mL 濾液放入 4 ℃冰箱中靜置 12 h，取上層韭菜汁（相當(dāng)于新鮮韭菜 10 g/ mL），備用。
1.3.2 大孔樹脂的預(yù)處理方法
用體積分?jǐn)?shù) 95％乙醇濕法裝柱，繼續(xù)用體積分?jǐn)?shù) 95％乙醇沖洗樹脂層，至流出液加水稀釋不渾濁。然后用蒸餾水反復(fù)洗柱，直到柱子里的大孔樹脂被洗成白色，即可投入使用。
1.3.3樣品分離
取 1.3.1 制備的韭菜汁 10 mL，樹脂柱上樣后靜置 30 min，用 45 mL 蒸餾水進(jìn)行洗脫，棄去前10 mL洗脫掖，然后按順序收集洗脫液三段（每段10 mL），分別標(biāo)記為樣品①、②、③號。然后用45 mL 體積分?jǐn)?shù) 50%的乙醇進(jìn)行洗脫，棄去前 10mL洗脫液，再按每段 10 mL 收集洗脫液三管，分別標(biāo)記為樣品④、⑤、⑥號。再用 45 mL 體積分?jǐn)?shù)95%的乙醇對柱子進(jìn)行洗脫，棄去前 10 mL 洗脫液，再按每段 10 mL 收集洗脫液三管，分別標(biāo)記為樣品⑦、⑧、⑨號。
1.3.4樣品處理
對④～⑨號樣品分別減壓濃縮后，冷凍干燥，分別加入 10 mL蒸餾水溶解（相當(dāng)于新鮮韭菜10 g / mL），4 ℃冰箱中備用。使用前將①～⑨韭菜汁樣品用微孔濾膜過濾除菌。
1.4抑菌實驗
1.4.1 菌液的制備
從斜面上接種供試菌于肉湯培養(yǎng)基中，37 ℃培養(yǎng) 18 h，將制備的菌液稀釋至（106~107）個菌 / mL。
1.4.2 制含菌平板及加樣
按文獻(xiàn)［6］、［7］的方法制備含菌平板：用融化的瓊脂培養(yǎng)基10 mL 倒于平皿中制成平板，用微量加樣槍取一種供試菌80 μL，用滅菌涂棒迅速將菌液涂抹勻制成含菌平板，每種供試菌制備 9 個含菌平板。將每個含菌平板分為 4 四個區(qū)，在各區(qū)中央打一小孔（d =0.70 cm），然后用移液槍吸取各樣品 100 μL于不同小孔中，用蒸餾水作為陰性對照。每個樣品對每個菌種做 3 個平行板，于 37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24 h，觀察抑菌大小，記錄結(jié)果。
1.5 紫外掃描
用 UV- 2550 紫外分光光度計分別對抗菌實驗樣品①～⑨號，在 200 nm ~ 400 nm 范圍內(nèi)進(jìn)行步長為 1 nm 的紫外掃描，鑒定樣品成分的紫外光譜特征。

2 結(jié)果與分析
2.1 抑菌實驗結(jié)果
韭菜汁對大腸桿菌、綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌、痢疾桿菌都有抑制作用。韭菜汁的大孔樹脂分離成分中，蒸餾水洗脫段（①～③號樣品）對 4 種供試菌都無抑菌能力。體積分?jǐn)?shù) 50%的乙醇洗脫前兩段成分（④、⑤號樣品）對 4 種供試菌都有抑菌能力，④號樣品對 4 種供試菌的抑菌能力明顯比⑤號樣品強(qiáng)；而⑥號樣品對 4 種供試菌無抑菌能力。體積分?jǐn)?shù) 95%的乙醇洗脫段（⑦～⑨樣品），對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌有抑菌能力，抑菌能力順序為⑦號＞⑧號＞⑨號，顯示有效抑菌成分隨流出時間的推移濃度在降低，且這些成分對綠膿桿菌、痢疾桿菌供試菌都無抑菌能力。
2.2紫外掃描結(jié)果
韭菜汁的蒸餾水洗脫部分①、②、③號樣品的紫外光譜吸收曲線形狀、峰位相似，說明韭菜汁的蒸餾水洗脫部分前、中、后段成分相同。體積分?jǐn)?shù)50%乙醇洗脫部分④、⑤、⑥號樣品及體積分?jǐn)?shù)95%的乙醇洗脫段⑦樣品的紫外吸收光譜峰形與蒸餾水洗脫部分的樣品圖譜形狀明顯不同，且每個樣品的光譜圖各有不同特征，說明體積分?jǐn)?shù)50%乙醇不同洗脫段及體積分?jǐn)?shù) 95%的乙醇洗脫段⑦樣品的主要分離成分不同。體積分?jǐn)?shù) 95%的乙醇洗脫段的⑧、⑨號樣品的紫外吸收光譜，峰形狀基本相同，但與①～⑦號樣品的紫外吸收光譜都不同，⑧號樣品光譜的峰高明顯大于⑨號樣品，說明⑧號、⑨號兩個樣品所含物質(zhì)成分沒有紫外吸收差別，峰高不同說明體積分?jǐn)?shù) 95%乙醇的這兩個洗脫段所收集的主要成分濃度不相同。

來源：惠合膠體磨研磨設(shè)備廠

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韭菜汁分離成分的抑菌作用研究